使用者:Catfaster/沙盒
圖像外觀
相襯顯微鏡現實的圖片的特徵是灰色的背景上面可以顯示出明暗的樣品結構。明暗的邊緣表示了樣品光學密度的變化,例如細胞和水的邊界,這通常表現為在暗的物體周圍會有明亮的光暈。
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相襯照明,樣品的對比度來自穿過樣品中不同長度光路的光線的相干。
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亮場照明,樣品的對比度來自對樣品不同部位對光線的吸收。
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偏光顯微技術,樣品的對比度來自樣品不同部位對偏振光的不同旋轉程度。
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暗場照明,樣品的對比度來自樣品散射的光線。
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未染色的洋蔥根尖細胞塗片,徠卡HiPlan 100x/1.25 oil Ph3相襯物鏡拍攝,左圖使用ph3相襯光闌照明,右圖使用明場照明。
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透過T25細胞培養瓶拍攝的HeLa細胞
技術優缺點
相對於其它對比增強技術,如DIC,相襯顯微技術不使用偏振光照明,因而可以觀察雙折射介質,如透過塑料培養瓶或培養皿進行活細胞觀察,這在細胞學研究上特別有用。如和落射螢光(EPI)技術連用,相襯物鏡可以透過70%的激發光,優於其它反差增強技術(相位板產生部分衰減),所以相襯往往作為輔助成像功能出現在螢光顯微鏡上。此外,相襯套件的採購價位相對較低,使用調整也較為簡單。[1]
相襯顯微技術存在一些固有的不足。由於在聚光鏡中使用環形光闌,啟用相襯照明時聚光鏡的數值孔徑有所限制,所以軸向解析度較低。另外,標本和背景折射率差異較大的分界處會出現明顯的光暈,導致如細胞膜、細胞器外緣等位置的細節被遮蔽[1]。
測試